Giemsakleuring

Malariaparasieten worden bij voorkeur gekleurd met Giemsa, een Romanowsky kleurstof die hiervoor bij uitstek geschikt is. Een pH van 7.1–7.2 is van essentieel belang voor een goede kleuring van parasieten en witte bloedcellen.

De kleuring is het mooist in uitstrijkpreparaten maar ook de dikke druppelpreparaten worden goed gekleurd op voorwaarde dat:

-       De preparaten goed droog zijn.

-       De concentratie van de kleurstof laag is en de kleurtijd voldoende

          lang, m.a.w. wanneer de concentratie van de kleurstof wordt

          verhoogd om de kleurtijd te verkorten worden de preparaten minder

          mooi.

Giemsa-stockoplossing:

Giemsakleurstoffen verschillen in samenstelling: voor de kleuring van malariaparasieten is de Giemsakleurstof die Azure II of Azure B bevat het meest geschikt.

De in alcohol opgeloste stockoplossing is kant en klaar te koop maar kan ook zelf worden bereid. Gebruik betrouwbare kleurstoffen (bijv. Merck of BDH).

Veiligheid: De Giemsa stockoplossing bevat methanol en is zeer licht ontvlambaar (bij temperaturen boven 12ºC). Plaats de oplossing niet in de zon en voorkom dat deze op een andere manier wordt verhit. De Giemsa stockoplossing is toxisch: vermijdt inademing en contact met de huid (R11-R23/24/25 –R39/23/24/25). (S2-7-16-24)

Giemsa-buffer pH 7.1-7.2 (zie ook: pH Giemsabuffer):

Deze fosfaatbuffer kan worden bereid uit buffertabletten (Merck) of zelf worden bereid. Zelfgemaakte Giemsabufffer:

-    Stamoplossing A: 9,06 gram KH2PO4 in 500 ml aqua dest. 

-    Stamoplossing B: 23,72 gram Na2HPO4.2 H2O in 1000ml aqua dest

Voeg 28 ml van oplossing A bij 72 ml van oplossing B en meng goed.

Uitvoering van de kleuring:

1.         Laat de preparaten goed drogen aan de lucht.

2.         Fixeer de uitstrijkjes in 100% watervrije methanol. De dikke druppel niet fixeren. Fixeer kort! Maximaal 45 seconden en zorg dat de dikke druppel niet in contact komt met de methanol.

3.          Maak een werkoplossing van 2,5% door vlak voor gebruik de             

            Giemsa-stockoplossing te mengen met Giemsabuffer (bijv. 2,5 ml

            stockoplossing en 97,5 ml buffer).

   4.      Kleur de preparaten gedurende 45 minuten in een kleurbakje met

          de werkoplossing.

   5.      Spoel de preparaten voorzichtig af door het kleurbakje met de

           preparaten schuin onder een zachtlopende kraan te houden tot dat

           het iriserend groene laagje kleurstofneerslag aan de oppervlakte is

           afgespoeld.

   6.      Spoel de preparaten in drie verschillende bakjes water en zet ze in

          verticale positie te drogen.